草酸和草酸钙结晶损伤肾小管上皮细胞的差异蛋白质组学研究

作者： 陈书尚 [1] ; 孙颖浩 [2] ; 高小峰 [2] ; 吴卫真 [1] ; 杨顺良 [1] ; 徐延昭 [1] ; 谭建明 [1]

摘要：目的分析并鉴定草酸和一水草酸钙（COM）结晶损伤人肾小管上皮细胞（HK2）后细胞蛋白质谱的表达变化，探讨肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的可能作用。方法体外培养正常HK2细胞至90％融合后，换无血清培养基，随机分为2组。实验组培养基内加入2mmol／L草酸＋200mg／LCOM结晶，37℃孵育。分别抽提2组细胞的总蛋白，双向凝胶电泳结合液相色谱-电喷雾离子阱质谱（LC—ESI—MS／MS）技术对2组中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定。蛋白印迹法对鉴定出的蛋白进行验证。结果成功建立细胞总蛋白的双向凝胶电泳图谱，经软件分析和质谱鉴定出差异蛋白质12个：FK506结合蛋白4、α-烯醇酶、M2型丙酮酸激酶、ATP合成酶α亚单位、3’，5，-二磷酸核苷酸酶1、核磷蛋白2、L-乳酸脱氢酶B、芽胞发芽蛋白3、Cofilin-1、Fascin、40S核糖体蛋白S17和胞液氨基肽酶1。差异蛋白涉及细胞能量代谢、细胞增殖、凋亡、钙离子通道活性调控、细胞运动及信号转导等多种生理活动。蛋白印迹法检测示HK-2细胞损伤后EN01蛋白表达上调，而Cofilin-1表达下调，证实双向凝胶电泳和质谱分析可靠。结论高浓度草酸和COM结晶可使正常人HK-2细胞蛋白表达发生改变，这些差异表达蛋白既可起到细胞的自我保护作用，又可能通过相应途径在肾结石的形成中起重要作用。

关键字： 肾小管上皮细胞    草酸    一水草酸钙    肾结石    蛋白组学      

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