膀胱癌组织及血浆中微小RNA的差异表达情况分析

作者： 张永海 [1] ; 陈凌武 [2] ; 徐庆春 [1] ; 林伟强 [1] ; 黄月英 [1] ; 黄洪 [1] ; 张源锋 [1] ; 刘国元 [1]

摘要：目的 寻找并鉴定在膀胱癌和正常膀胱组织,及患者血浆中差异表达的微小RNA（miRNA）.方法 2010年10月至201 1年1月收集24例膀胱尿路上皮癌（T1～4期）患者的新鲜肿瘤组织及血浆,其中非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱尿路上皮癌组织各12例;12例良性前列腺增生患者的正常膀胱组织及血浆作为对照组.用Trizol试剂提取总RNA,用Nanodrop 2000及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA检测,用标记酶Hy3TM荧光基团标记RNA的探针和miRCURYTM芯片杂交,用GenePix 4000B芯片扫描仪及GenePix pro V6.0进行图像采集和数据分析,对差异表达的miRNA进行检测,用实时定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,qPCR）对部分差异表达的miRNA进行验证.结果 与正常膀胱组织比较,在非肌层浸润性膀胱癌组织中,有77个miRNA表达上调,72个miRNA表达下调;在肌层浸润性膀胱癌组织中,42个miRNA表达上调,104个miRNA表达下调.qPCR测定miR-720和miR-191的表达水平与基因芯片结果一致.与对照组比较,膀胱癌血浆样本中有19个miRNA表达上调,9个miRNA表达下调.qPCR测定miR-10b、miR-622、miR-634和miR-483-3p的表达水平变化趋势与基因芯片结果一致.结论 在非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱尿路上皮癌组织及血浆中miRNA的差异表达普遍存在,可作为膀胱癌的潜在临床诊断标志物.

关键字： 膀胱癌    微小RNA    芯片    实时定量PCR    血浆      

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