大黄素通过非Caspase依赖通路诱导膀胱癌细胞BIU87凋亡的机制

作者： 严泽军 ; 程跃 ; 蒋军辉 ; 谢国海 ; 胡嘉盛

摘要：目的 研究大黄素对人膀胱癌细胞BIU87凋亡及凋亡诱导因子（apoptosisinducingfactor，AIF）和核酸内切酶G（EndonucleaseG，EndoG）的mRNA和蛋白表达的影响，探讨大黄素的抗癌机制。方法取对数生长期的人膀胱癌细胞株BIU87，分别加入大黄素和Caspase抑制剂z—VAD—FMK共同培养。实验分为4组：空白对照组、Z—VAD—FMK组、大黄素组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对体外培养的BIU87细胞增殖的影响，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT—PCR检测各组细胞AIF和EndoGmRNA的表达，蛋白质印迹法检测各组细胞AIF和EndoG蛋白的表达。结果MTT检测显示，大黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强。根据Ic50值，选择80μmol／L的大黄素干预72h作为干预条件。大黄素组细胞凋亡率为（44．57±1．52）％，大黄素＋Z—VAD—FMK组为（35．58±1．61）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR和蛋白质印迹结果显示，大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIFmRNA和蛋白为1．74±0．11、2．59±0．13，大黄素组为1．36±0．08、1．89．4-0．14，空白对照组为0．374-0．02、0．53±0．11，Z—VAD—FMK组为0．42．4-0．06、0．444-0．07，大黄素＋Z—VAD—FMK组与其他各组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；大黄素＋Z—VAD—FMK组中EndoGmRNA和蛋白为2．28±0．15、3．31±0．36，大黄素组为1．85±0．13、2．15±0．27，空白对照组为0．53±0．07、0．71±0．16，Z—VAD—FMK组为0．61±0．04、0．67±0．22，大黄素＋Z—VAD—FMK组与其他各组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达，通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡。

关键字： 大黄素    膀胱肿瘤    凋亡诱导因子    核酸内切酶G    细胞凋亡      

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