膀胱尿路上皮癌细胞株E2F3基因与miR-17—5p和miR-20a的相互作用

作者： 任海林 [1] ; 孙岩 [2] ; 李世斌 [2] ; 梁恩利 [2] ; 胡海龙 [2] ; 韩瑞发 [2]

摘要：目的研究E2F3基因、miR-17—5p和miR-20a在膀胱尿路上皮癌细胞株中的表达及相互影响，探讨E2F3基因与miR-17—5p和miR-20a在膀胱癌发生中的作用。方法用pcDNA3．1-HA—E2F3和pAAV—siRNA—E2F3质粒在膀胱癌细胞株5637中分别过表达和敲低E2F3基因，用miR-17-5p和miR-20a的模拟物和反义寡核苷分别过表达和敲低miR-17—5p和miR-20a后，实时荧光定量PCR法检测miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的变化，蛋白质印迹法检测E2F3蛋白水平的变化。结果E2F3基因过表达后，miR-17-5p和miR-20a的2值分别为2．26±0．30和4．044-0．51，与对照组（1．00±0．00）比较差异有统计学意义（P〈0．05）；敲低E2F3后，miR-17—5p和miR-20a的2值分别为0．49±0．02和0．65±0．04，与对照组（1．00±0．00）比较差异有统计学意义（P〈0．05）；同时过表达miR．17．5p和miR-20a，E2F3的mRNA水平明显下调，蛋白质平均灰度值为55．31±7．89，对照组为103．67±13．61，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；同时敲低miR17—5P和miR-20a后，E2F3的mRNA比对照显著上调，蛋白质平均灰度值为295．68±19．25，与对照组平均灰度值为103．67±13．61比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论E2F3基因可上调miR-17—5p和miR-20a的表达，miR-17—5p和miR-20a可以下调E2F3基因的表达。E2F3基因、miR-17—5p和miR．20a在膀胱尿路上皮癌中形成调节环路，协调膀胱肿瘤细胞的生长。

关键字： E2F3基因    微小RNA    膀胱尿路上皮癌    基因调控      

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